Provjera učinkovitosti sterilizacije autoklava

Jedan od najvažnijih instrumenata u mikrobiološkom laboratoriju je sterilizator, pri čemu se najčešće koristi autoklav (parni sterilizator visokog pritiska). Prema GB 4789.1-2016, laboratorijsku opremu treba redovito pregledavati i/ili kalibrirati (s inspekcijskim oznakama), održavati se i servisirati kako bi se osigurala odgovarajuća performansi i operativna sigurnost. No, je li vaš autoklav prošao takve inspekcije? A ako želite izvršiti provjeru, kako biste to trebali učiniti? Danas ćemo sažeti ključne metode za provjeru učinkovitosti sterilizacije autoklava.

Provjera učinkovitosti sterilizacije autoklava općenito uključuje metode kao što su kemijski pokazatelj, maksimalni termometar, epruveta za samostalnu temperaturu i biološki pokazatelj. Iako ove metode dijele slične principe - uglavnom potvrđuju da li sterilizator dostigne potrebnu temperaturu tijekom sterilizacije - možete odabrati jedan ili više na temelju specifičnih uvjeta vašeg laboratorija.

1. Metoda kemijskog indikatora

Načelo: Kemijski pokazatelji podvrgnuti su promjeni boje ili oblika u određenim uvjetima temperature i vremena. Ova promjena koristi se za utvrđivanje jesu li ispunjeni parametri sterilizacije.

Općenita stavka u laboratorijima je 3M traka za indikator autoklava, koja mijenja boju nakon sterilizacije. Traka je izrađena od termosenzibilnih kemikalija, programera boja i materijala za boje, ispisane u uzorku pruge na ljepljivoj vrpci. Primjenjuje se izravno na vanjsku stranu paketa sterilizacije, s minimalnom duljinom od 5 cm. Pritisnite vrpcu lagano kako biste osigurali dobro prianjanje i brtvljenje. Nakon što su bili izloženi 121 ° C tijekom 20 minuta ili 130 ° C tokom 4 minute, dijagonalne bijele pruge na vrpci trebale bi se potpuno pretvoriti u crno. Ako je promjena boje neujednačena ili nepotpuna, paket se smatra pravilno steriliziran.

2. Maksimalna metoda termometra

Načelo: Ova metoda koristi živa termometar koji se ne vraća na nižu temperaturu nakon zagrijavanja, slično tradicionalnom medicinskom termometrom. Ukazuje na maksimalnu temperaturu dosegnutu tijekom sterilizacije.

Za provjeru, stavite termometar žive unutar vode ispunjene vodom Erlenmeyer. Tijekom sterilizacije postavite tikvicu na gornji i donji dio autoklava. Nakon postupka provjerite odgovara li očitanje termometra potrebnu temperaturu. Ova metoda može samo provjeriti temperaturu i ne može potvrditi je li ispunjen zahtjev za sterilizacijom, tako da predstavlja minimalni standard za provjeru autoklave.

3. Metoda samo-izrađene temperaturne cijevi

Načelo: Ova metoda koristi određene kemikalije koje se tope i rekristaliziraju na određenim temperaturama, s karakterističnim kristalima oblika nakon hlađenja. Te su kemikalije zapečaćene u malim staklenim cijevima i postavljene unutar autoklava. Nakon sterilizacije, kristalni oblik se ispituje kako bi se utvrdilo je li dosegnuta ispravna temperatura.

Benzojeva kiselina se obično koristi, s talištem od 121–123 ° C, koja se usklađuje sa standardnom temperaturom sterilizacije autoklava. Čvrsta benzojeva kiselina je zapečaćena u malim staklenim cijevima i stavljena je u autoklav. Nakon sterilizacije, opaža se stanje benzojeve kiseline kako bi se potvrdilo je li ciljana temperatura postignuta. Kao i maksimalna metoda, ovaj pristup samo provjerava temperaturu, a ne trajanje sterilizacije.

4. Metoda biološkog indikatora

Načelo: Ova metoda koristi ne-patogene spore Geobacillus stearothermophilus kao indikatorske organizme za procjenu učinkovitosti toplinske sterilizacije. Ove su spore vrlo otporne na toplinu, s otpornošću sličnom onom u sporama patogenih Clostridium botulinum, što ih čini prikladnim pokazateljima za provjeru učinkovitosti sterilizacije.

Biološki pokazatelji dostupni su u tri oblika: Spore suspenzije, trake spora i integrirane cijevi spora i srednje. Obično se postavljaju na pet lokacija u spremniku za sterilizaciju: prednji, srednji i stražnji dio donjeg sloja, kao i središnje točke gornjeg i srednjeg sloja. Nakon sterilizacije, pokazatelji se inokuliraju u vodu bromokresol ljubičasto-glukoze-pepton i inkubiraju se na 55–60 ° C 2–7 dana. Ako medij ostane jasan i nepromijenjen u boji, spore su ubijene, što ukazuje na dobru sterilizaciju. Ako medij postane žuta i mutna, spore su preživjele, sugerirajući loše performanse sterilizacije. I suspenzije spora i trake spora slijede isti postupak validacije.

Komercijalne epruvete za biološki pokazatelj također se obično koriste u laboratorijima. Sadrže spore Geobacillus Stearothermophilus i zapečaćene staklene ampule s medijem za rast. Cijevi se postavljaju u cijeli spremnik za sterilizaciju. Nakon autoklaviranja, staklena ampula se drobi kako bi se oslobodio medija, a cijev se inkubira na 56 ° C, uz pozitivnu kontrolu. Ako sterilizacija nije adekvatna, preživjele spore će rasti i pretvoriti juhu žutu. Ako je sterilizacija učinkovita, spore su inaktivirane, a juha ostaje ljubičasta.

Frekvencija provjere

Trenutno ne postoji strogi nacionalni standard u vezi s učestalošću provjere učinkovitosti autoklave. Očekuje se da će laboratoriji uspostaviti vlastiti raspored provjere i strogo se pridržavati. S obzirom na jednostavnost upotrebe i pouzdanost rezultata, preporučujemo korištenje pokazatelja u kombinaciji s epruvetama za biološke pokazatelje, jer nude jednostavnu radnju i sveobuhvatnu provjeru učinkovitosti sterilizacije.

Bilješke o sterilizaciji (nije potrebno za neke uvezene potpuno automatske autoklave)
Kada koristite parni sterilizator visokog pritiska, ključno je izbaciti sav hladni zrak unutar komore kada se pušta para. Tek nakon što se ukloni sav hladni zrak ako se ispušni ventil zatvori. Ako ostane bilo koji zrak, mjerač tlaka može ukazivati ​​na ispravan tlak, ali stvarna temperatura unutar komore će propasti. Što se više zadržava zrak, veća je odstupanja između tlaka i temperature, što potencijalno rezultira nepotpunom sterilizacijom. (To se često primjećuje tijekom sterilizacije medija za fermentaciju, gdje mjehurići zraka ostaju u malim vodećim cijevima - pokušajte detaljnije iscrpljujući hladni zrak.)