Provjera efekta sterilizacije autoklava

Jedan od bitnih laboratorijskih instrumenata u mikrobiološkom laboratoriju je sterilizator, a autoklavi su najčešće korišteni tip. Prema GB 4789.1-2016, laboratorijsku opremu treba redovito pregledavati i/ili kalibrirati (s odgovarajućim označavanjem), održavati i servisirati kako bi se osigurala operativna performanse i sigurnost. No, prolazi li vaš sterilizator slične inspekcije? Ako je takva validacija potrebna, kako se treba provoditi?

Danas ćemo sažeti ključne aspekte validacije učinkovitosti sterilizacije za autoklave.

Uobičajene metode za potvrđivanje učinkovitosti sterilizacije autoklava uključuju metodu kemijskog indikatora, metodu termometra s fiksnom točkom, metodu samo-izrađene temperaturne sonde i metodu biološkog indikatora. Principi koji stoje iza ovih metoda su slični, prvenstveno se fokusiraju na provjeru da li temperatura unutar sterilizatora dostiže potrebnu razinu tijekom sterilizacije. Ovisno o specifičnim uvjetima laboratorija, za validaciju se može odabrati jedna ili višestruka metoda.

1. Metoda kemijskog indikatora
Načelo: Kemijski pokazatelji prolaze promjenu boje ili deformacije kada su izloženi određenoj temperaturi i trajanju, omogućujući procjenu jesu li ispunjeni parametri sterilizacije.

Općenito korišteni pokazatelj u laboratorijima je 3M traka za indikator autoklava, koja mijenja boju prije i nakon sterilizacije kako bi ukazala na učinkovitost. Ova traka izrađena je s kemikalijama osjetljivim na toplinu i sredstvima za razvijanje boja ispisanim u prugama na posebnoj ljepljivoj vrpci. Vrpcu treba primijeniti na vanjsku stranu pakiranja, s minimalnom duljinom od 5 cm, i čvrsto pritisnuta za bolje prianjanje i brtvljenje. Nakon sterilizacije na 121 ° C tijekom 20 minuta ili 130 ° C tokom 4 minute, dijagonalne bijele pruge na traci postat će potpuno crne. Ako je promjena boje neujednačena ili nepotpuna, paket možda nije ispunio uvjete sterilizacije.

2. Metoda termometra s fiksnom točkom
Načelo: Ova metoda koristi živa termometar koji zadržava dostignutu najveću temperaturu, slično tradicionalnom kliničkom termometrom. Pomaže u određivanju maksimalne temperature postignute unutar autoklava tijekom sterilizacije.

Za validaciju, živa termometar postavlja se unutar velike konusne tikvice napunjene vodom. Tijekom sterilizacije, tikvica je postavljena i na gornjem i donjem dijelu autoklava. Nakon sterilizacije, očitanje termometra provjerava se na potrebnu temperaturu. Međutim, ova metoda provjerava samo temperaturu i ne potvrđuje je li trajanje sterilizacije bilo dovoljno, što ga čini najosnovnijim standardom za validaciju autoklava.

3. Metoda samo-izrađene temperaturne sonde
Načelo: Ova metoda koristi karakteristike taljenja i rekristalizacije određenih kemikalija kada su izložene toplini. Brtvanjem ovih kemikalija unutar malih staklenih cijevi i stavljanjem u autoklav, formiranje kristala nakon sterilizacije može ukazivati ​​je li potrebna temperatura.

Najčešće korišteni reagens je benzojeva kiselina koja ima talište od 121–123 ° C, što usko podudara s potrebnom temperaturom sterilizacije. Tijekom sterilizacije, čvrsta benzojeva kiselina je zapečaćena u maloj staklenoj cijevi i postavljena unutar autoklava. Nakon postupka ispituje se kristalna struktura benzojeve kiseline kako bi se utvrdilo je li potrebna temperatura.

Kao i metoda termometra s fiksnom točkom, ovaj pristup ukazuje samo na temperaturu i ne može potvrditi je li trajanje sterilizacije bilo dovoljno.

4. Metoda biološkog indikatora
Načelo: Ova metoda koristi ne-patogene spore Geobacillus Stearothermophilus kao indikatorski organizmi za procjenu učinkovitosti toplinske sterilizacije. Ove su spore vrlo otporne na toplinu i imaju toplinski otpor sličan Clostridium botulinum sporama, što ih čini pouzdanom referencom za procjenu odgovara li autoklav zahtjevi za sterilizacijom.

Biološki pokazatelji dolaze u tri oblika:

Suspenzije spora
Spore trake
Spore trake u kombinaciji s kulturnim medijem (biološki indikator cijevi)
Biološki pokazatelji obično se postavljaju na pet lokacija unutar komore za sterilizaciju:

Donja razina: prednja, srednja i leđa
Gornja razina: centar
Nakon sterilizacije, pokazatelji se inokuliraju u bromocresol ljubičastu-glukozu peptone i inkubiraju se na 55–60 ° C 2–7 dana:

Ako kulturni medij ostane jasan i nepromijenjen u boji, spore su ubijene, što ukazuje na učinkovitu sterilizaciju.
Ako medij postane žuto i mutno, spore su preživjele, što znači da je proces sterilizacije bio neučinkovit.
Ista metoda provjere valjanosti odnosi se i na suspenzije spora i trake spora.

Mnogi laboratoriji također koriste komercijalne epruvete za biološke pokazatelje, koje djeluju na sličan način na suspenzije i trake spora. Ove epruvete sadrže spore G. stearothermophilus zajedno sa staklenim ampulom kulturnog medija. Nakon autoklaviranja, staklena ampula unutar cijevi se drobi kako bi se oslobodio kulturni medij, a cijev se inkubira na 56 ° C, s uključenom pozitivnom kontrolom.

Ako sterilizacija nije bila učinkovita, održive spore će rasti, pretvarajući žutu juhu.
Ako je sterilizacija bila uspješna, spore su inaktivirane, a juha ostaje ljubičasta.
Učestalost validacije autoklava
Trenutno nema strogih regulatornih standarda koji definiraju koliko često autoklave moraju biti potvrđeni. Međutim, laboratoriji bi trebali uspostaviti vlastiti raspored validacije i strogo se pridržavati.

Radi jednostavnog rada i pouzdane validacije, toplo se preporučuju kemijska traka za indikator i biološki pokazatelji. Ove su metode prilagođene korisnicima i pružaju sveobuhvatnu procjenu učinkovitosti sterilizacije.

Ključna razmatranja za autoklaviranje
(Neki potpuno automatizirani uvezeni autoklavi možda neće zahtijevati ručno odzračivanje)

Kada koristite autoklav, neophodno je ukloniti hladni zrak iz komore tijekom uvođenja pare. Ispušni otvor trebao bi ostati otvoren dok se sav hladni zrak ne izbaci, osiguravajući ravnomjerno raspodjelu temperature iznutra.

Ako bilo koji zrak ostane unutar komore, mjerač tlaka može ukazivati ​​na ispravan tlak, ali stvarna temperatura bit će niža od očekivanog. Što je preostali zrak, to je veća odstupanja, što dovodi do nepotpune sterilizacije.

(Za one koji se susreću s mjehurićima zraka u malim cijevima prilikom sterilizacije fermentacije, pokušajte povećavati evakuaciju zraka kako biste poboljšali rezultate.)